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          rasH轉基因小鼠

          1.基本信息

          品系名稱:CB6F1-Tg (HRAS)9/Vst

          常用名:rasH小鼠

          背景:BALB/cAnNCrl*C57BL/6NCrl

          毛色:黑色

          鑒定方法:Standard PCR


          2.品系建立

          維通達rasH小鼠是rasH2轉基因小鼠的替代模型之一。rasH2轉基因鼠是由日本CIEA研制,通過原核注射使小鼠全身過表達人HRAS基因獲得,該小鼠模型廣泛用于藥物安評中的致瘤性評價試驗。其自發腫瘤率并不高,在出生的6個月內很少出現腫瘤或癌前細胞增生,但表現出對基因毒性化合物及非基因毒性化合物的致瘤敏感性增強,在受到致癌物誘導時可在較短時間內高發腫瘤。1990年代,被美國FDA批準用于藥物安全性評價中的致瘤性試驗,用為期半年的實驗代替原規定的為期兩年的普通嚙齒類動物致瘤性試驗。


          維通達構建了包含人HRAS基因的編碼序列、內含子以及上下游非編碼區的染色體DNA片段的轉基因載體,獲得目的片段DNA全長約為7.6 Kb,并在其最末一個內含子的序列中引入一個點突變(據報道該突變可增強HRAS基因表達),使其可以在HRAS基因自身調控序列的驅動下表達)。將轉基因片段注射到C57BL/6N小鼠受精卵原核內,獲得轉基因陽性首建鼠,分別擴繁建系,進行表型分析,從中篩選符合致瘤性試驗的第9個系予以保留。用數字定量PCR法確定,該系單位點串聯轉基因拷貝數4個,用染色體步移法確定轉基因串聯片段,整合于小鼠第6號染色體上。利用Western blot檢測小鼠各器官組織轉基因表達情況,結果表明HRAS在小鼠前胃和肺臟中具有較高的表達量。

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          3.繁育信息

          交配方式:陽性(雜合)配野生

          日糧信息:SPF 繁殖鼠糧

          平均產子數(只):6

          繁育周期(周):36


          4.rasH小鼠的致瘤敏感性

          1.rasH小鼠在6月齡前極少自發腫瘤。在12月齡時約有10%~20%死于自發腫瘤。

          2.當用Urethane 50mg/kg ip.tiw誘導時,在6個月內70%以上小鼠發現肺部腫瘤,也有部分有肝臟腫瘤、肉瘤等。

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          肉瘤及其病理切片,40X倍


          3.rasH小鼠應用于污水的致瘤性實驗。使用甲基亞硝基脲作為陽性對照,在三個月時觀察到小鼠胃部有實體瘤產生。污水灌胃使rasH小鼠在胃部能夠形成明顯的腫瘤,也在乳腺觀察到腫瘤。


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          rasH轉基因小鼠核心技術:
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